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绵羊痘病毒PCR试剂盒
参考价:¥1990

型号:

更新时间:2023-07-12  |  阅读:860

详情介绍

产品名称:

商品名称:绵羊痘病毒PCR试剂盒

Name:Sheeppox Virus(SPPV) PCR试剂盒

包装规格:50T/盒


预期用途

绵羊痘是由羊痘病毒属中绵羊痘病毒(Sheep pox virus, SPV)引起羊的一种急性、热性、接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为需通报传染病,我国列为一类动物疾病。该病主要表现为体温升高,皮肤、黏膜、内脏器官表面发生广泛性的丘疹、疱疹或结节,淋巴结肿大,病畜消瘦,毛的品质下降,产乳量大幅度降低,严重时导致死亡。羊痘分布广泛,世界各国具有本病爆发和流行的相关报道,中东、非洲北部及中部、亚洲流行尤为严重。

本试剂盒适用于检测绵羊皮肤病变组织、淋巴结、水泡液等样本中的绵羊痘病毒,用于绵羊痘病毒感染的辅助诊断。

检验原理:

绵羊痘病毒PCR试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对绵羊痘病毒特异性引物,结合一条特异性探针, 用荧光 PCR 技术对绵羊痘病毒的 DNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染病料的病原学诊断。

试剂组成:

包装规格

50T/盒

SPV 反应液

500μL×2 管

酶液

50μL×1 管

SPV 阳性质控品

50μL ×1 管

阴性质控品

250μL ×1 管

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

储存条件及有效期:

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

适用仪器:

ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

标本采集:

绵羊皮肤病变组织、淋巴结 5g;水泡液取 1mL。

保存和运输:

采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h;若需长期保存,应放置-70℃以下保存,冻融不超过 3 次。

使用方法:

1.  样品处理(样本处理区)

1.1  样本前处理

组织样品:每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手/术/剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于1.5mL 灭菌离心管中;咽/拭子样品直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2  核酸提取

推荐采用优利科(上海)生命科学有限公司生产的核酸/提取/或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提取,请按照试剂说明书进行操作。

2.  试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满

10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

SPV 反应液

酶液

用量

19μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,20μL/管。

3.  加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀, 短暂离心。

4.  PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1  将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2  设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;

荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择

ROX 参比荧光,选择 None 即可。

4.3  推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95℃

2min

2

45 cycles

95℃

15sec

60℃

30sec

5.   结果分析判定

5.1   结果分析条件设定(请参照各仪器使用说明书进行设置,以分析 ABI7500 仪器为例)

反应结束后自动保存结果,根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值(用户可根据实际情况自行调整,Start 值可设在 3~15、End 值可设在 5~20,使阈值线位于扩增曲线指数期,阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线),点击 Analyze 自动获得分析结果。

5.2   结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤40,且曲线有明显的指数增长曲线; 阴性:样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。

5.3   质控标准

阴性质控品:无特异性扩增曲线或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数增长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

6.检测方法的局限性

1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

3. 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

4. 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

6. 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

7. 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】

1. 所有操作严格按照说明书进行;

2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,wan全混匀并短暂离心;

3. 反应液应避光保存;

4. 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【参考文献】

[1] 康文玉, 徐自忠, 高洪等. 羊痘病毒[J]. 中国畜牧兽医, 2004, 31(12):33-36.

[2] 陈轶霞. 羊痘诊断技术研究进展[J]. 安徽农业科学, 2008, 36(34):15008-15009.

[3]   国家质量监督检验检疫总局. SN/T 2452-2010 绵羊痘和山羊痘检疫技术规范[S].

[4]   李杨, 于少雄, 颜新敏, 等. 绵羊痘病毒 TaqMan-MGB 荧光定量 PCR 快速检测方法的建立[J]. 中国预防兽医学报, 2016.


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