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HCEC人角膜上皮细胞
简称:HCEC
中文名:人角膜上皮细胞
别名:人角膜上皮细胞,HCEC细胞
种属:人
来源:角膜;上皮细胞
培养条件:DMEM
培养环境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
状态:贴壁
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
细胞培养操作步骤:
1. 吸走多余培养基,加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞;
2. 吸干净PBS后
加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA,轻轻摇晃培养皿使胰-酶浸没细胞表面,培养瓶放37度培养箱消化;
(细胞对于消化比较敏感,消化过度会严重影响细胞状态,导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落,可以轻轻吹下时即可终止,禁止消化到细胞*漂浮。混匀细胞时尽量轻柔,不要吹出大量气泡。)
3. 加入6-8ml*培养基终止消化,轻轻吹下细胞混匀;
4. 将混匀的细胞1000rpm(约150g)离心3min,弃上清,再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养;
传代比例: 不同细胞生长速度不一,具体传代比例视细胞生长速度而定,大部分细胞适用1:3-1:4传代,生长较慢的细胞可以1:2传代。
Cell cryopreservation
1.冻存液:92%*培养基+8%DMSO(可以根据实验室条件自行选择)
2.降温步骤:4度10min,-20度2h,-80过夜后液氮保存。
冻存方法:
1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞;
2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管;
3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存。
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