【产品名称】

商品名称：黄热病毒（YFV）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）

Name ：Diagnostic Kit for Yellow Fever Virus RNA(Real-Time RT-PCR Method)

【包装规格】25T/盒、50T/盒

【预期用途】 本试剂盒适用于检测的疑似感染病人的静脉血等标本中黄热病毒 RNA，适用于黄热病毒感染的辅助诊断。 其检测结果仅供参考。

【检验原理】 本试剂盒用一对黄热病毒特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对黄热病毒 RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】 ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】 疑似感染病人的静脉血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。

【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运 输，严禁反复冻融。

【使用方法】 1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理 按 RNA 提取试剂盒说明书进行提取

1.2 核酸提取 推荐采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提 取，请按照试剂说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管 数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。

4. PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25ul；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。

4.2 推荐循环参数设置：

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析 后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线； 可疑：检测通道 35<Ct 值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38，且曲线有明显的增长曲线， 判定为阳性，否则为阴性； 阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

6. 质控标准 阴性质控品：Ct>38 或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

7. 检测方法的局限性 1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关； 2.样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果； 3.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果； 4.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果； 5.不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果； 6.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果； 7.本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】 1.所有操作严格按照说明书进行； 2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，*混匀并短暂离心； 3.反应液应避光保存； 4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧； 5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服； 6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染； 7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器； 8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。